动物造模,miR-223全基因敲除小鼠 中国实验动物信息网 2021-09-23 1408

　　目标：您想使用双 sgRNA 构建 miR-223 基因敲除小鼠吗？

　　方法：设计一个miR-223基因的双sgRNA，将体外转录的sgRNA和Cas9 mRNA注射到受精的C57BL/6小鼠卵中？基因组DNA经PCR扩增测序鉴定基因型，同时采集小鼠肝脏，粉碎后提取总RNA，实时PCR分析肝脏中miR-223的表达情况。

　　结果：设计了miR-223基因双sgRNA体外转录纯化显微注射小鼠受精卵获得miR-223基因突变小鼠？测序结果显示，突变小鼠具有三种基因型。 6 bp缺失突变，但不影响miR-223序列；另外两个是162 bp和168 bp缺失突变，完全缺失miR-223前体和成熟区序列？与野生型相比，这两种小鼠肝脏组织几乎不可能，是否检测到miR-223的表达？

　　结论：你想设计双sgRNA并应用CRISPR/Cas9技术成功构建miR-223基因敲除小鼠吗？