动物造模,探针荧光定量PCR 中国实验动物信息网 2021-09-14 1067

　　目的:  建立一种高效的应用TaqMan探针荧光定量PCR技术对 Leprdb/ + 小鼠子代基因分型的方法｡

　　方法：  提取228例 Leprdb/ +小鼠子代鼠尾DNA,针对 Lepr 基因的突变位点(rs1801133)设计1 对PCR 引物和2 条 TaqMan探针｡ 设定条件进行实时荧光PCR 扩增,用SDS 软件对SNP 位点进行分型｡ 通过2月龄动物的肥胖表现 型验证并进行Hardy⁃Weinberg平衡检验｡

　　结果:  用建立的TaqMan探针荧光定量PCR 方法对228份样本进行检 测,其中GG基因型64份,基因型频率为0.1929;GT基因型123份,基因型频率为0.5395;TT基因型41份基因型 频率为0.2807｡ TaqMan探针荧光定量PCR 方法分型结果与通过肥胖表现型分型结果比较,灵敏度为97.56%,特异度为99.47%｡

　　结论:  应用TaqMan探针荧光定量PCR 技术可实现对 Lepr db/ +小鼠子代基因位点的早期分型检测,方法简便,高效｡