动物造模,基因敲除 中国实验动物信息网 2021-11-10 1731

　　目的:构建并鉴定巨噬细胞条件性Atg5基因敲除小鼠,为研究巨噬细胞自噬在肾脏疾病发病机制中的作用提供动物模型。

　　方法:将引进LysM-Cre小鼠与Atg5flox/+小鼠进行杂交、Atg5flox/+小鼠自交,分别获得基因型为Atg5flox/+Cre+/-和Atg5flox/floxCre-/-的子代小鼠;将上述两种基因型的子代小鼠杂交,得到巨噬细胞条件性Atg5基因敲除小鼠(Atg5flox/floxCre+/-,Atg5-/-)和对照小鼠(Atg5flox/floxCre-/-,Atg5+/+)。提取小鼠鼠尾组织基因组DNA,经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳后,在DNA水平判断小鼠基因型;提取小鼠骨髓来源巨噬细胞RNA和蛋白,利用基因测序和Western blot技术检验Atg5基因的敲除效果。

　　结果:成功建立巨噬细胞条件性Atg5基因敲除小鼠模型,该小鼠存活并且可育。在基因及蛋白水平上,巨噬细胞Atg5基因敲除成功;且与Atg5 小鼠相比,Atg5 小鼠自噬基础水平低下(p62明显增多,LC3II明显减少),对于自噬激活剂雷帕霉素刺激不能恢复到正常基础水平。

　　结论:利用Cre/loxp系统,本研究成功构建并鉴定出条件性巨噬细胞Atg5基因敲除小鼠,为在动物水平研究巨噬细胞自噬在肾脏疾病发病机制中的作用提供研究平台。