动物造模,骨髓间充质干细胞 中国实验动物信息网 2024-01-17 2668

　　目的：观察在体外培养条件下,慢病毒载体介导的HCV受体基因 OCLN/CD81转染对树鼩骨髓间充质干细胞生物学特性的影响及基因的表达情况｡

　　方法：利用本室分离鉴定保存的树鼩 BM-MSCs,构建含人 OCLN/CD81基因的慢病毒载体,并分别将 CD81和 OCLN 基因转染到BM-MSCs中,荧光倒置显微镜和流式细胞仪 检测转染效率,CCK8法检测转染后BM-MSCs的细胞增殖情况,成骨成脂细胞诱导分化检测其多向分化潜能｡ 采 用实时荧光定量及WB方法检测HCV受体(OC/CD81)基因mRNA和蛋白表达情况和转染后BM-MSCs干性基 因的表达｡

　　结果：以MOI为100 转染含人 OCLN/CD81 基因的慢病毒载体后,LV-CD81 转染效率达99.4%,LVOCLN转染效率22.6%｡ 细胞增殖趋势与未转染基因的BM-MSCs相似,转染后的BM-MSCs仍可以向成骨成脂细 胞分化,但能力有所下降｡ 干性基因NANOG mRNA表达增高,差异有显著性(P< 0.05),LIN28AmRNA表达下降, 差异有显著性(P<0.05)｡ 转染后树鼩BM-MSCs能高效表达所转入的外源基因｡

　　结论： 构建的含人OCLN/CD81 基因的慢病毒载体可以成功转染树鼩BM-MSCs,并高效表达所转入的基因,转染后对树鼩BM-MSCs的多向分化潜 能有一定的影响｡