动物造模 中国实验动物信息网 2022-03-10 1429

　　目的：应用CRISPR/Cas9系统构建BRCA1､BRCA2和CDH1三基因乳腺特异性修饰小鼠模型｡

　　方法：针对小鼠BRCA1､BRCA2和CDH1基因分别设计并合成sgRNA,构建pX330⁃spCas9⁃U6⁃gRNA共表达载体,将共表达载体中CBh启动子替换为乳腺组织特异性启动子WAP｡利用小鼠受精卵原核注射的方法制备转基因小鼠｡

　　结果：共注射受精卵190枚,得到活性受精卵130枚,移植4只受体鼠｡产下F0代仔鼠42只,鉴定出11只转基因阳性小鼠,阳性率为26.19%｡F0代阳性鼠繁育后得到39只F1代仔鼠,其中9只为F1代转基因阳性鼠｡

　　结论：通过构建乳腺组织特异表达Cas9载体成功制备了转基因阳性鼠｡