动物造模 中国实验动物信息网 2022-05-31 901

　　目的：  以基因工程技术制备猴免疫缺陷病毒(SIV)的 SIV30蛋白作为抗原诊断试剂,建立免疫梳方法(IC)用于特异性检测实验猴血清中抗SIV的抗体IgG｡

　　方法：  应用原核表达载体pGEX-4T-1构建SIV SIV30 基因的重组表达质粒,并在感受态细胞BL21中表达,将该重组蛋白纯化后作为诊断抗原,建立免疫梳标准化检测程序,并应用于临床检测｡

　　结果：  *佳抗原包被量为0.02mg/mL;制备好的IC均能够特异性检测到相应的SIV阳性血清而不与其他病毒血清间发生交叉反应,表明该检测方法特异性强;敏感性分析结果表明,SIV30蛋白能够敏感地检测到1∶400倍稀释的SIV阳性血清;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测3次,变异系数(CV) 均小于10%;利用该检测方法在对10份可疑猴血清样品进行检测,IC与ELISA检测结果一致率为100.0%,Kappa =1：000｡

　　结论：  原核表达了SIV30蛋白,制备了IC,并应用于临床检测｡ 该检测方法灵敏度高､特异性强､重复性好,具有良好的实用性｡