动物造模 中国实验动物信息网 2022-06-07 916

　　目的： 在细胞水平筛选狨猴B2m基因的有效沉默靶点，并进行验证。

　　方法： 查询人源B2m验证过的有效siRNA靶位点序列，与狨猴B2m基因序列进行同源性比较，选择匹配靶点合成shRNA序列。将体外合成的2条干扰序列分别与慢病毒载体FUGW-TDT连接，构建FUGW-TDT-shb2m干扰表达质粒，在聚乙烯亚胺（polyethylenimine，PEI）介导下转染293T细胞，转染后48h，用实时荧光定量法检测转染细胞中B2m基因mRNA的水平。

　　结果： 筛选出2个与狨猴完全同源的B2m沉默靶位点，分别位于B2m mRNA的290~310 bp，665~685 bp；B2m两个靶点在转录水平的沉默效率分别为（46.54±7.91）%（P < 0.05）和（83.22±4.37）%（P< 0.0001），差异有显著性。

　　结论： 成功构建成FUGW-TDT-shb2m重组质粒；在细胞水平筛选得到2个有效的B2m基因沉默靶点；为后续有关介导狨猴B2m基因沉默的研究奠定了基础。